母牛发情鉴定的目的是及时发现发情应配母牛，正确掌握配种时间，适时配种，防止误配漏配。实践证明，正确掌握母牛发情和排卵规律、抓住最佳配种期进行适时配种是提高母牛受胎率的重要措施之一。
鉴定母牛发情的方法有外部观察法、试情法、阴道检查法和直肠检查法等。
1、外部观察法
外部观察法是鉴定母牛发情的主要方法，主要根据母牛的外部表现来判断发情情况。母牛发情时往往兴奋不安，食欲和奶量减少，尾根举起，追逐、爬跨其他母牛并接受它牛爬跨，发情牛爬跨其他牛时，阴门搐动并滴尿，具有公牛交配动作。外阴部红肿，从阴门流出粘液。
2、试情法
试情法是根据母牛爬跨的情况来发现发情牛，这是最常用的方法。此法尤其适用于群牧的繁殖母牛群，可以节省人力，提高发情鉴定效果试情法有2种：一种是将结扎输精管的公牛放入母牛群中，日间放在群牛中试情，夜间公母分开，根据公牛追逐爬跨情况以及母牛接受爬跨的程度来判断母牛的发情情况;另一种是将试情公牛接近母牛，如母牛喜靠公牛，并作弯腰弓背姿势，表示该母牛可能发情。
3、阴道检查法
阴道检查法是用阴道开张器来观察阴道的粘膜、分泌物和子宫颈口的变化来判断发情与否。发情母牛阴道黏膜充血潮红，表面光滑湿润;子宫颈外口充血、松弛、柔软开张，排出大量透明的纤维性粘液，如玻棒状(俗称吊线)，不易折断。粘液最初稀薄，随着发情时间的推移，逐渐变稠，量也由少变多。到发情后期，量逐渐减少且粘性差，颜色不透明，有时含淡黄色细胞碎屑或微量血液。不发情的母牛阴道苍白、干燥，子宫颈口紧闭，无粘液流出。
4、直肠检查法
进行直肠检查法时，检查者须将指甲剪短、磨光、手臂上涂润滑剂，先用手抚摸肛门，然后将手指并拢成锥形，以缓慢的旋转动作伸入肛门，掏出粪便。再将手伸入肛门，手掌展平，掌心向下，按压抚摸，在骨盆腔底部，可摸到一个长圆形质地较硬的棒状物，即为子宫颈。沿子宫颈再向前摸，在正前方可摸到一个浅沟，即为角间沟。沟的两旁为向前向下弯曲的两侧子宫角。沿着子宫角大弯向下稍向外侧，可摸到卵巢。用手指检查子宫角的形状、大小、反应以及卵巢上卵泡的发育情况，来判断母牛的发情。发情母牛子宫颈稍大、较软，由于子宫粘膜水肿，子宫角体积也增大，子宫收缩反应比较明显，子宫角坚实。在子宫角的两侧，可摸到两个卵巢，卵巢上发育的卵泡突出卵巢表面，光滑，触摸时略有波动，发育最大时的直径为1.8～2.5厘米，排卵前有一触即破感。不发情的母牛，子宫颈细而硬，子宫较松弛，触摸不那么明显，收缩反应差。成年母牛的卵巢较育成牛大(因为经过多次发情，不少退化的黄体仍然存在)，卵巢的表面有小突起，质地坚卖。
值得注意的是，在直肠内触摸时要用指肚进行，不能用手指乱抓，以免损伤直肠粘膜。在母牛努责(排粪动作)或肠管收缩时不能将手臂硬向里推，可待它努责或收缩停止后再继续检查。一般发情正常的母牛采用外部观察就可准确的鉴定发情，没必要采用直肠检查，特别是不熟练的技术人员，直肠检查很容易触破卵泡，影响牛受胎。
母牛的发情表现虽有一定规律性，但由于内外因素的影响，有时表现不大明显或欠规律性，因此在确定输精适期时，必须综合判断，具体分析。